(Flow cytometry, FCM) je stanični analizator koji mjeri intenzitet fluorescencije obojenih staničnih markera.To je visokotehnološka tehnologija razvijena na temelju analize i razvrstavanja pojedinačnih stanica.Može brzo izmjeriti i klasificirati veličinu, unutarnju strukturu, DNA, RNA, proteine, antigene i druga fizička ili kemijska svojstva stanica, a može se temeljiti na zbirci tih klasifikacija.
Protočni citometar uglavnom se sastoji od sljedećih pet dijelova:
1 Protočna komora i sustav fluida
2 Laserski izvor svjetlosti i sustav za oblikovanje snopa
3 Optički sustav
4 Elektronika, sustav za pohranu, prikaz i analizu
5 Sustav razvrstavanja ćelija
Među njima, laserska ekscitacija u izvoru laserske svjetlosti i sustavu za formiranje snopa glavno je mjerenje fluorescentnih signala u protočnoj citometriji.Intenzitet pobudnog svjetla i vrijeme ekspozicije povezani su s intenzitetom fluorescentnog signala.Laser je koherentni izvor svjetlosti koji može pružiti jednovalnu duljinu, visokog intenziteta i visoke stabilnosti.To je idealan izvor pobudnog svjetla za ispunjavanje ovih zahtjeva.
Postoje dvije cilindrične leće između izvora lasera i protočne komore.Ove leće fokusiraju lasersku zraku kružnog presjeka emitiranu iz laserskog izvora u eliptičnu zraku manjeg presjeka (22 μm × 66 μm).Energija lasera unutar ove eliptične zrake raspoređuje se prema normalnoj raspodjeli, osiguravajući dosljedan intenzitet osvjetljenja za stanice koje prolaze kroz područje laserske detekcije.S druge strane, optički sustav sastoji se od više skupova leća, rupica i filtera, koji se mogu grubo podijeliti u dvije skupine: uzvodno i nizvodno od protočne komore.
Optički sustav ispred protočne komore sastoji se od leće i rupice.Glavna funkcija leće i rupice (obično dvije leće i rupica) je fokusiranje laserske zrake kružnog presjeka koju emitira laserski izvor u eliptičnu zraku manjeg presjeka.To distribuira lasersku energiju prema normalnoj distribuciji, osiguravajući dosljedan intenzitet osvjetljenja za stanice u području laserske detekcije i minimizirajući smetnje od zalutale svjetlosti.
Postoje tri glavne vrste filtara:
1: Dugopropusni filtar (LPF) - propušta samo svjetlo valnih duljina viših od određene vrijednosti.
2: Kratkopropusni filtar (SPF) - propušta samo svjetlo s valnim duljinama ispod određene vrijednosti.
3: Pojasni filtar (BPF) - propušta samo svjetlo u određenom rasponu valnih duljina.
Različite kombinacije filtara mogu usmjeriti fluorescentne signale na različitim valnim duljinama na pojedinačne fotomultiplikatorske cijevi (PMT).Na primjer, filtri za otkrivanje zelene fluorescencije (FITC) ispred PMT-a su LPF550 i BPF525.Filtri koji se koriste za otkrivanje narančasto-crvene fluorescencije (PE) ispred PMT-a su LPF600 i BPF575.Filtri za otkrivanje crvene fluorescencije (CY5) ispred PMT-a su LPF650 i BPF675.
Protočna citometrija se uglavnom koristi za sortiranje stanica.S napretkom računalne tehnologije, razvojem imunologije i izumom tehnologije monoklonskih antitijela, njihova primjena u biologiji, medicini, farmaciji i drugim područjima postaje sve raširenija.Ove primjene uključuju analizu stanične dinamike, staničnu apoptozu, tipizaciju stanica, dijagnozu tumora, analizu učinkovitosti lijekova itd.
Vrijeme objave: 21. rujna 2023
