(Flow cytometry, FCM) je stanični analizator koji mjeri intenzitet fluorescencije obojenih staničnih markera. To je visokotehnološka tehnologija razvijena na temelju analize i razvrstavanja pojedinačnih stanica. Može brzo izmjeriti i klasificirati veličinu, unutarnju strukturu, DNA, RNA, proteine, antigene i druga fizička ili kemijska svojstva stanica, a može se temeljiti na zbirci tih klasifikacija.
Protočni citometar uglavnom se sastoji od sljedećih pet dijelova:
1 Protočna komora i sustav fluida
2 Laserski izvor svjetlosti i sustav za oblikovanje snopa
3 Optički sustav
4 Elektronika, sustav za pohranu, prikaz i analizu
5 Sustav sortiranja ćelija
Među njima, laserska ekscitacija u izvoru laserske svjetlosti i sustavu za formiranje snopa glavno je mjerenje fluorescentnih signala u protočnoj citometriji. Intenzitet pobudnog svjetla i vrijeme ekspozicije povezani su s intenzitetom fluorescentnog signala. Laser je koherentni izvor svjetlosti koji može pružiti jednovalnu duljinu, visokog intenziteta i visoke stabilnosti. To je idealan izvor pobudnog svjetla za ispunjavanje ovih zahtjeva.
Postoje dvije cilindrične leće između izvora lasera i protočne komore. Ove leće fokusiraju lasersku zraku kružnog presjeka emitiranu iz laserskog izvora u eliptičnu zraku manjeg presjeka (22 μm × 66 μm). Energija lasera unutar ove eliptične zrake raspoređuje se prema normalnoj raspodjeli, osiguravajući dosljedan intenzitet osvjetljenja za stanice koje prolaze kroz područje laserske detekcije. S druge strane, optički sustav sastoji se od više skupova leća, rupica i filtera, koji se mogu grubo podijeliti u dvije skupine: uzvodno i nizvodno od protočne komore.
Optički sustav ispred protočne komore sastoji se od leće i rupice. Glavna funkcija leće i rupice (obično dvije leće i rupica) je fokusiranje laserske zrake kružnog presjeka koju emitira laserski izvor u eliptičnu zraku manjeg presjeka. To distribuira lasersku energiju prema normalnoj distribuciji, osiguravajući dosljedan intenzitet osvjetljenja za stanice u području laserske detekcije i minimizirajući smetnje od zalutale svjetlosti.
Postoje tri glavne vrste filtara:
1: Dugopropusni filtar (LPF) - propušta samo svjetlo valnih duljina viših od određene vrijednosti.
2: Kratkopropusni filtar (SPF) - propušta samo svjetlo s valnim duljinama ispod određene vrijednosti.
3: Pojasni filtar (BPF) - propušta samo svjetlo u određenom rasponu valnih duljina.
Različite kombinacije filtara mogu usmjeriti fluorescentne signale na različitim valnim duljinama na pojedinačne fotomultiplikatorske cijevi (PMT). Na primjer, filtri za otkrivanje zelene fluorescencije (FITC) ispred PMT-a su LPF550 i BPF525. Filtri koji se koriste za otkrivanje narančasto-crvene fluorescencije (PE) ispred PMT-a su LPF600 i BPF575. Filtri za otkrivanje crvene fluorescencije (CY5) ispred PMT-a su LPF650 i BPF675.
Protočna citometrija se uglavnom koristi za sortiranje stanica. S napretkom računalne tehnologije, razvojem imunologije i izumom tehnologije monoklonskih antitijela, njihova primjena u biologiji, medicini, farmaciji i drugim područjima postaje sve raširenija. Ove primjene uključuju analizu stanične dinamike, staničnu apoptozu, tipizaciju stanica, dijagnozu tumora, analizu učinkovitosti lijekova itd.
Vrijeme objave: 21. rujna 2023
