(Protočna citometrija, FCM) je analizator stanica koji mjeri intenzitet fluorescencije obojenih staničnih markera. To je visokotehnološka tehnologija razvijena na temelju analize i sortiranja pojedinačnih stanica. Može brzo izmjeriti i klasificirati veličinu, unutarnju strukturu, DNK, RNK, proteine, antigene i druga fizikalna ili kemijska svojstva stanica, a može se temeljiti na prikupljanju tih klasifikacija.
Protočni citometar se uglavnom sastoji od sljedećih pet dijelova:
1 Protočna komora i fluidni sustav
2 Izvor laserske svjetlosti i sustav za oblikovanje snopa
3 Optički sustav
4 Elektronika, sustav za pohranu, prikaz i analizu
5 Sustav za sortiranje ćelija
Među njima, laserska ekscitacija u izvoru laserske svjetlosti i sustavu za formiranje snopa glavno je mjerenje fluorescentnih signala u protočnoj citometriji. Intenzitet pobudne svjetlosti i vrijeme ekspozicije povezani su s intenzitetom fluorescentnog signala. Laser je koherentni izvor svjetlosti koji može osigurati osvjetljenje jedne valne duljine, visokog intenziteta i visoke stabilnosti. To je idealan izvor pobudne svjetlosti koji zadovoljava te zahtjeve.
Između laserskog izvora i protočne komore nalaze se dvije cilindrične leće. Ove leće fokusiraju lasersku zraku kružnog presjeka koju emitira laserski izvor u eliptičnu zraku manjeg presjeka (22 μm × 66 μm). Laserska energija unutar ove eliptične zrake raspoređuje se prema normalnoj raspodjeli, osiguravajući konzistentan intenzitet osvjetljenja stanica koje prolaze kroz područje laserske detekcije. S druge strane, optički sustav sastoji se od više skupova leća, rupica i filtera, koji se mogu grubo podijeliti u dvije skupine: uzvodno i nizvodno od protočne komore.
Optički sustav ispred protočne komore sastoji se od leće i rupice. Glavna funkcija leće i rupice (obično dvije leće i rupica) je fokusiranje laserske zrake kružnog presjeka koju emitira laserski izvor u eliptičnu zraku manjeg presjeka. To raspoređuje lasersku energiju prema normalnoj raspodjeli, osiguravajući konzistentan intenzitet osvjetljenja ćelija u području detekcije lasera i minimizirajući interferenciju od zalutale svjetlosti.
Postoje tri glavne vrste filtera:
1: Dugopropusni filtar (LPF) - propušta samo svjetlost s valnim duljinama većim od određene vrijednosti.
2: Kratkopropusni filtar (SPF) - propušta samo svjetlost s valnim duljinama ispod određene vrijednosti.
3: Pojasni filtar (BPF) - propušta samo svjetlost u određenom rasponu valnih duljina.
Različite kombinacije filtera mogu usmjeriti fluorescentne signale na različitim valnim duljinama na pojedinačne fotomultiplikatorske cijevi (PMT). Na primjer, filteri za detekciju zelene fluorescencije (FITC) ispred PMT-a su LPF550 i BPF525. Filtri koji se koriste za detekciju narančasto-crvene fluorescencije (PE) ispred PMT-a su LPF600 i BPF575. Filtri za detekciju crvene fluorescencije (CY5) ispred PMT-a su LPF650 i BPF675.
Protočna citometrija se uglavnom koristi za sortiranje stanica. S napretkom računalne tehnologije, razvojem imunologije i izumom tehnologije monoklonskih antitijela, njezina primjena u biologiji, medicini, farmaciji i drugim područjima postaje sve raširenija. Te primjene uključuju analizu stanične dinamike, apoptozu stanica, tipizaciju stanica, dijagnozu tumora, analizu učinkovitosti lijekova itd.
Vrijeme objave: 21. rujna 2023.
