(Protočna citometrija, FCM) je stanični analizator koji mjeri intenzitet fluorescencije obojenih staničnih markera. To je visokotehnološka tehnologija razvijena na temelju analize i sortiranja pojedinačnih stanica. Može brzo izmjeriti i klasificirati veličinu, unutarnju strukturu, DNK, RNA, proteine, antigene i druga fizička ili kemijska svojstva stanica, a može se temeljiti na prikupljanju ovih klasifikacija.
Protočni citometar uglavnom se sastoji od sljedećih pet dijelova:
1 sustav protoka i fluidijski sustav
2 Laserski sustav izvora svjetlosti i oblikovanja snopa
3 Optički sustav
4 Sustav elektronike, pohrane, prikaza i analize
5 Sustav sortiranja stanica
Među njima je lasersko pobuđivanje u sustavu laserskog izvora svjetlosti i formiranju snopa glavno mjerenje fluorescentnih signala u protočnoj citometriji. Intenzitet svjetla pobude i vrijeme izlaganja povezani su s intenzitetom fluorescentnog signala. Laser je koherentni izvor svjetlosti koji može osigurati jednojalnu duljinu, visoko intenzitet i osvjetljenje visoke stabilnosti. To je idealan izvor svjetla pobuđenja koji ispunjava ove zahtjeve.
Postoje dvije cilindrične leće između izvora lasera i komore protoka. Ove leće fokusiraju laserski snop s kružnim presjekom koji se iz laserskog izvora emitira u eliptičnu gredu s manjim presjekom (22 µm × 66 µM). Laserska energija unutar ovog eliptičnog snopa raspoređena je prema normalnoj raspodjeli, osiguravajući dosljedni intenzitet osvjetljenja za stanice koje prolaze kroz područje laserskog otkrivanja. S druge strane, optički sustav sastoji se od više setova leća, rupa i filtera, koji se mogu otprilike podijeliti u dvije skupine: uzvodno i nizvodno od komore protoka.
Optički sustav ispred komore protoka sastoji se od leće i rupe. Glavna funkcija leće i rupe (obično dvije leće i rupa) je usredotočiti laserski snop s kružnim presjekom koji laserski izvor emitira u eliptičnu gredu s manjim presjekom. To distribuira lasersku energiju prema normalnoj raspodjeli, osiguravajući dosljedan intenzitet osvjetljenja za stanice u području laserskog otkrivanja i minimizirajući smetnje iz zalutale svjetlosti.
Postoje tri glavne vrste filtera:
1: Dugi prolazni filter (LPF) - Omogućuje samo svjetlost s valnim duljinama višim od određene vrijednosti.
2: Kratko propusni filter (SPF) - Omogućuje samo svjetlost s valnim duljinama ispod određene vrijednosti.
3: BandPass filter (BPF) - Omogućuje prolazak svjetla u određenom rasponu valne duljine.
Različite kombinacije filtera mogu usmjeriti signale fluorescencije na različitim valnim duljinama na pojedinačne fotomultiplikarnije cijevi (PMT). Na primjer, filtri za otkrivanje zelene fluorescencije (FITC) ispred PMT -a su LPF550 i BPF525. Filteri koji se koriste za otkrivanje narančasto-crvene fluorescencije (PE) ispred PMT su LPF600 i BPF575. Filteri za otkrivanje crvene fluorescencije (CY5) ispred PMT su LPF650 i BPF675.
Protočna citometrija uglavnom se koristi za sortiranje stanica. S napretkom računalne tehnologije, razvoj imunologije i izum tehnologije monoklonskih antitijela, njegove primjene u biologiji, medicini, ljekarni i drugim poljima postaju sve rašireniji. Te primjene uključuju analizu dinamike stanica, staničnu apoptozu, tipkanje stanica, dijagnozu tumora, analizu učinkovitosti lijeka, itd.
Post Vrijeme: rujna-21-2023
